公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

細(xì)胞

3、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)

晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

收到細(xì)胞后如何操作:

1、首先，觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)及時(shí)與我司技術(shù)支持聯(lián)系。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天再取出進(jìn)行觀察。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

4、可將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管中，備用；細(xì)胞傳代時(shí)，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

5、確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時(shí)將細(xì)胞凍存，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，避免后期實(shí)驗(yàn)失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失。

6、建議客戶收到細(xì)胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我們技術(shù)支持溝通交流。

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

公司正在出售的產(chǎn)品：

Leupaxin： 樁蛋白抗體 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3

B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞HM 大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(AIL-R1)ELISA 試劑盒 Biotin/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記 0.1ml

LRPAP1： 脂蛋白受體相關(guān)蛋白/低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1抗體 CL-0065CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2

FGF17 Protein Human 重組人 FGF17 蛋白 大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(AIL)ELISA試劑盒 Bovine IgG (親和化) IgG 10mg

LEPREL2： 皮屑樣蛋白2抗體 ALDH4A1 Others Human 人 ALDH4A1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

HPV33 E6： 人類(lèi)狀瘤病毒33 E6蛋白抗體 人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2B

COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0182P815(小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK 人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA 試劑盒 Immunoglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1 免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1 0.5mg

HEXB chain A： Beta基己糖苷酶beta亞基蛋白A鏈抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0902

PA-1(人卵巢腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA 試劑盒 CD133 造血干細(xì)胞抗原CD133 0.5mg

phospho-HSP70 (Tyr611)： 0酸化熱休克蛋白-70抗體 PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

A431(A-431)人表皮癌細(xì)胞人皮膚黑色素瘤細(xì)胞;SK-MEL-1 大鼠解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)ELISA試劑盒 SAA(Mouse Serum amyloid A) 小鼠血清淀粉樣蛋白A 96T

SCA14： 蛋白激酶C亞型G抗體 家貓腎細(xì)胞;CATK1

人絨毛間葉成纖維細(xì)胞(HVT)( 5×105 ) MCF-7(MCF7)(ATCC來(lái)源), 人癌細(xì)胞 Human 大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒 ACA(Mouse anti-centrol and centrosome antibody) 小鼠抗中性粒/中心體抗體 人心肌細(xì)胞-總RNAHCM-a NA

CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)ELISA 試劑盒 6-K-PG  大鼠6酮前列腺素 96T

Phospho-PKC gamma (Thr674)： 0酸化蛋白激酶C亞型G抗體 HDAC8 Others Human 人 HDAC8 / HDACL1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。