公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

NCI-H2087(人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 Mo-MuLv/3T3(Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞) 大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA 試劑盒 CH  大鼠 96T

MOT8： 甲狀腺激素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7/8抗體 小耳豬腎細(xì)胞;SEPfk

IFNW1 Protein Human 重組人 Ierferon omega-1 / IFNω / IFNW1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅠ)ELISA試劑盒 PTN(Human pleiotrophin)  人多效生長因子 96T

MARK2： 絲酸/蘇酸蛋白激酶MARK2抗體 CAMK1G Others Human 人 CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

大鼠雪旺氏細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅠ)ELISA 試劑盒 Apo-E (Rabbit Apolipoprotein E)  兔載脂蛋白E 96T

hHR23A： 紫外切除修復(fù)蛋白RAD23A抗體 TIMP1 Others Mouse 小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

牛腎細(xì)胞;MDBK(BVDV-free) 人干細(xì)胞因子受體(SCFR)ELISA 試劑盒 DHAV(duck hepatitis A virus) 鴨甲型肝炎A病毒抗原 0.5mg

hHR23b： 紫外切除修復(fù)蛋白RAD23B抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM932

Li-7(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)ELISA 試劑盒 Des(Desmin) 結(jié)蛋白抗原 0.5mg

HIBADH： 3-羥基異脫氫酶抗體 人神經(jīng)細(xì)胞裂解物HNL

HELA 人子宮頸癌細(xì)胞MDA-MB-468 人癌細(xì)胞 大鼠鈣網(wǎng)蛋白(C)ELISA試劑盒 VLA  大鼠遲現(xiàn)抗原 96T

PDZK3： 前列腺癌激活蛋白抗體 Beta-TC-6細(xì)胞，小鼠胰腺癌beta細(xì)胞 人癌細(xì)胞,SKBr-2HL細(xì)胞 小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞MA-h

GPR56 Others Human 人 GPR56 / TM7LN4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK2)ELISA試劑盒 CT  大鼠降鈣素 96T

PDZK4： PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK4蛋白抗體 CM-H101新生兒表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

HCC827人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827 cells in human non small cell lung cancer RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒 ECHO IgM(Human EchoVirus IgM)  人艾柯病毒IgM 96T