公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Metallothionein 3： 金屬硫蛋白3抗體 TH Others Mouse 小鼠 TH / Tyrosine Hydroxylase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠前脂肪細胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠血小板衍生生長因子B(PDGFB)ELISA試劑盒 MHB  小鼠高鐵血紅蛋白 96T

MAP4K6： 原活化蛋白激酶MAP4K6抗體 CaEs-17, 人食管癌細胞株 癌細胞,SHZ-88細胞 SJCRH30 [RC13; RMS 13; SJRH30](人骨髓橫紋肌肉癌細胞)

SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 198-462) 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒 LF/LTF (Rabbit Lactoferrin)  兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白 96T

MAP65： 擬南芥MAP65蛋白抗體 SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞;hFOB 1.19

hCG alpha 4： 甲狀腺促進激素alpha鏈 0.2ml

Rhesus antibody Rh C3c/Complement fragment 3c 補體片段C3c抗體 豬腎細胞;PK(15) 骨髓瘤細胞，FO細胞 G422細胞，KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤瘤株

RNASE1 Others Human 人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 人細胞裂解液 (陽性對照) 人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA 試劑盒 CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase) CD10抗原 0.5mg

H7N9 NA： A型流感病毒H7N9凝集素抗體 CL-0259BC-020(人癌細胞)5×106cells/瓶×2

HME1細胞，人黑色素瘤細胞 長雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;Mao 人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA 試劑盒 ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1) ZCWCC1抗原 0.5mg

Hs 815.Pl人胎盤細胞（有限細胞系）PAX2： 配對盒基因2抗體 豬胚胎傳代細胞;ST

小鼠心肌細胞(MCM)(1×106) QGY-7701, 人肝癌細胞 Human 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)ELISA試劑盒 FLU A(Human Influenza viruses A)  人流感病毒A 96T

PAK2： p21激活激酶2抗體 星形細胞培養(yǎng)基SteCM

FLT3LG Protein Mouse 重組小鼠 FLT3L / Flt3 ligand 蛋白 (Fc 標簽) 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA 試劑盒 uPA  大鼠型纖溶酶原激活物 96T

PLC beta 3： 0酯酶Cβ3抗體 STX7 Others Human 人 STX7 / Syaxin 7 人細胞裂解液 (陽性對照)

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。